影响制备高效价专一性抗血清的主要因素
1. 抗原本身的有关性质:抗原刺激免疫动物产生抗体的能力,是否使用佐剂,注射途径及注射间隔时间等。
2. 抗原必须纯化:对于免疫用的抗原,成分必须均一,除了作为免疫原的抗原物质外,不能含有可激发机体产生其它抗体的物质。在制备病毒抗血清时,必须去除寄主蛋白成分;假若这种材料是互不相同的病毒复合感染的,还必须将这些互不相同的病毒一一分离。只有制备了具有一定浓度的纯化的抗原,才能制备出高效价的专业性抗血清。
3. 抗原与免疫动物必须具有易源性:虽然在动物体里存在着自体的隔离束缚,成为自体免疫原,从而引起自身免疫方面的疾病。但是机体内绝大多数蛋白质和核酸对自身是不能激发产生抗体的。在正常情况下,种属差异相距愈近,其抗原物质使机体产生相应抗体的能力愈弱,反之则愈强。显然,从免疫过的兔子体内得到的抗体后,在制备第二抗体时,就不能把兔子抗血清中提取的免疫球蛋白作为抗原再去注射另一只兔子,而是应该去注射羊、驴或马等种属关系相距较远的动物。
4. 抗原分子必须具备一定的分子量和结构:作为蛋白质抗原,分子量一般不应该低于10000,但对于有些分子,情况就比较特殊,分子量仅为451的N-乙酰-L酪氨酸免疫豚鼠可以产生抗体,而角蛋白和非溶性的纤维蛋白分子量虽然远远大于10000,却不能激发机体产生抗体。从总的情况看,分子量越小则进入机体后越容易被排除。另外,抗原的免疫原性还取决于抗原分子表面的某些化学基团(即抗原决定簇)的性质,如数目、电荷、光学构型和空间构象,而抗原决定簇的特异结构又与整个蛋白质的立体结构密切相关。完整结构的病毒粒子、病毒的外壳蛋白和病毒白亚基单体三者之间的免疫原性是互不相同的。
5. 在制备抗血清时,最重要的是要注意抗原的纯化。否则,制备的抗血清将很难在免疫酶技术中使用。
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