JM109化学感受态细胞产品描述产品

在基因重组实验中，常使用感受态细胞摄取外源DNA以制备基因文库、重组质粒以及进行亚克隆等。

本品是经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。经使用pUC19质粒检测，本品转化效率可达10⁸ cfu/μg，广泛适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。本品适用于蓝白斑筛选，另对recA1和endA1进行特定的改造使其更能保证克隆DNA的稳定性以及更有利于高纯度质粒DNA的提取。

JM109感受态细胞基因型：recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 e14^-(mcrA^-) supE44 relA1 △(lac^-proAB)/F’ [traD36 proAB⁺lac Iq lacZ △M15]。

JM109化学感受态细胞产品组分

运输与保存方法

干冰运输。

JM109感受态细胞-80℃保存，pUC19质粒-20℃保存。有效期半年。

JM109化学感受态细胞注意事项

1）感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2）整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3）为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温，避免移液枪吹吸。

4）为防止转化不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，最低化实验可能遇到的风险。

使用方法

1）取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2）向100 μl感受态细胞悬液中加入2-10μl目的DNA或连接产物，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置20min。

3）将离心管置于42℃水浴中放置90s，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2min，该过程不要摇动离心管。

4）向离心管中加入500μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床振荡培养60min（200 rpm）， 目的是促使菌体复苏，抗性基因表达。

5）将离心管内容物混匀，根据实验要求（质粒，重组连接产物转化），吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，37℃培养12-16 h。