Product Information

293-F悬浮细胞源自293细胞株。用于高表达蛋白。293-F悬浮细胞增殖能力取决于细胞取材、培养技术、培养条件等综合因素。请按照正确的培养方法来解冻、传代，以此保证细胞具备良好的增殖能力，方便您的后继研究顺利进行。
质量控制：   
本细胞经过了检测，不含有细菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体。 

培养条件：
37℃，8% CO₂，PH值7.2~7.4，125rpm，无菌恒温培养。
用途：
本产品只提供给进一步的科研使用，不可应用于治疗等其他方面。

细胞相关操作：

293F细胞复苏

1.37°C水浴预热培养基（FreeStyle™ 293 Expression Medium）；
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；
3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；
4.弃上清，加入5ml培养基重悬细胞，用血小球计数板进行细胞计数，按细胞密度4-5×10⁵/ml接种到25ml无菌摇瓶中（带空气过滤通气孔的摇瓶）；
5.摇瓶置于37°C，8% CO₂的培养箱中的摇瓶架上，125rpm培养。

293F细胞传代
1.取细胞计数(详见293F细胞冻存)，当细胞密度达到1.0-3.0×10⁶/ml时（最好不要超过3.0×10⁶cells/ml），可传代；

2.37°C水浴预热培养基（FreeStyle™ 293 Expression Medium）；

3.在超净台中，加适量预热好的培养基到无菌摇瓶中，以细胞终密度为6-7×10⁵/ml接种细胞（也可1000rpm，5min离心后弃上清，用预热好的培养基重悬并调整细胞密度为6-7×10⁵/ml），转移到无菌摇瓶中；

4. 摇瓶置于37°C，8% CO₂的培养箱中的摇瓶架上，125rpm培养。

注：293F细胞对氧的要求较高，因此，悬浮培养必须具有高表面积体积比，否则细胞的生长会受到抑制。培养基的体积不能超过摇瓶的五分之二；即100毫升的摇瓶不能超过40ml培养基，250ml摇瓶不能超过100ml培养基。

293F细胞冻存

1.细胞计数:

1)洗净晾干血小板计数板和盖玻片，将盖玻片完全覆盖计数区；

2)充分混匀细胞，取少量(0.1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合，移液器吹吸混合均匀，用移液器取20ul混合液从盖玻片两端(与中间凹槽平行的两端)分别打入细胞，以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳；

3)显微镜下，数四个计数区的总细胞数，无活性细胞染成蓝色，活细胞不被染色；

4)细胞密度=细胞总数/4×10000×2；
这里10000是不变的，因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm即10^-4cm³计数池内，1cm³=1ml，将四个计数区的细胞数除以4取平均数，乘2是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。

5)细胞活性=活细胞数/细胞总数×100%。

注:细胞密度高时，可调整细胞悬液和台盼蓝的比例，计数时乘以相应的稀释倍数即可。

2.当细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以冻存细胞。

3.37°C水浴预热培养基（FreeStyle™ 293 Expression Medium）。

4.在超净台中将要冻存的细胞移入离心管，1000rpm离心5min。

5.弃上清，用90%培养液+10%DMSO的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为5-10×10⁶/ml。

6.将细胞悬液分装到冻存管中(1-1.5ml/管)。

7.将装有细胞的冻存管放入程序降温冻存盒，-20°C放1-2h后，-80°C过夜，然后快速转移到液氮中。

293F细胞贴壁培养

1. 37°C水浴预热培养基（FreeStyle™ 293 Expression Medium+10%FBS）；
2. 从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；
3. 在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；
4. 弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻晃匀；
5. 置于37°C，8% CO₂培养箱中培养；

6. 4-6小时后，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养；

7. 每天观察细胞的状态和长势；

8. 当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代；

9. 在超净台中，弃培养基，加入2-5mlPBS清洗细胞后，再加入1ml胰酶消化细胞；

10. 显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml培养基（FreeStyle™ 293 Expression Medium+10% FBS）终止消化；

11. 用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；

12. 将细胞移入离心管中，1000rpm离心5min；
13. 弃上清，加入15-20ml的培养基（含血清）重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度在1×10⁴ cells/cm² (2.5×10⁵ cells/T-25瓶），混匀细胞悬液，确保细胞均匀分布；

14. 将培养瓶置于37°C，8% CO₂的无菌培养箱中培养。