在体外培养细胞实验中，对于难养的细胞或者数量较少的细胞，常常需要预先在培养瓶或培养板底部加入一些活的原代细胞或者静息的肿瘤细胞以辅助目的细胞的生长，这就是饲养层细胞。至于饲养层细胞可以促进其它细胞生长的原理目前有两种解释：一种解释是饲养层细胞可以减小培养瓶或培养板对细胞的毒害作用；另一种解释是饲养层细胞可以释放出一些必要的生长因子，可以促进目的细胞的生长。在单抗制备过程中，刚刚融合的细胞和克隆化的细胞都比较难以生长，因此都需要添加饲养层才能较快地生长。因此在杂交瘤细胞筛选、克隆化和扩大培养过程中，加进饲养细胞是十分必要的。
饲养层细胞的来源主要有两种，一种是动物体内天然的细胞，另一种是商品化配制的饲养层替代品。单抗制备中可以使用的天然饲养层细胞主要有：腹腔巨噬细胞、脾脏细胞、胸腺细胞、放射线照射的成纤维细胞系等。虽然这些天然饲养层细胞中含有生长因子和激素等活性物质，可以促进骨髓瘤细胞生长繁殖，但是天然饲养层细胞的标准化制备一直存在诸多问题，不同的操作人员、操作方法、细胞来源都可能会引起不同批次的饲养层细胞之间的较大差异。饲养细胞的量为一般为2×10^4或10^5细胞/孔。一般在融合时选取腹腔巨噬细胞作为饲养层细胞，而在克隆化的过程中选择脾脏细胞做饲养细胞。主要是因为其制备方便且数量多，一般一只鼠的脾脏细胞可以铺10块96孔板，从而满足了克隆化时需要细胞数目多这一要求。
- 常规饲养层细胞的获取
腹腔巨噬细胞来源方便并且制备简单，且巨噬细胞具有清除死亡细胞和吞噬细胞碎片的能力，因此一般融合时会选择腹腔巨噬细胞作为饲养层细胞。
（1）取7～8周龄Balb/c雌鼠脱颈椎处死，于75%酒精浸泡消毒3~5min；
（2）在超净工作台内用无菌手术剪将小鼠腹腔剪开一个小口，用无菌胶头滴管将预冷的不完全培养基注入腹腔内，沿腹腔壁多次吹洗，充分悬起腹腔内细胞后转移至无菌离心管，重复2~3次；
（3）1000rpm，离心5min，弃上清重悬细胞，1000rpm，离心5min，重复洗涤细胞三次；
（4）加入完全培养基重悬细胞，稀释至所需用量体积，100μl/well加入96孔板；37℃，5%CO2饱和湿度细胞培养箱培养，备用。
克隆化时普遍选用脾细胞制备饲养层细胞。
（1）小鼠脱颈椎处死，于75%酒精浸泡消毒5min；
（2）无菌镊子摘取脾脏，剔除结缔组织后，于0.4目筛网中研磨，加适量不完全培养基制成细胞悬液，1000rpm，离心5min，重复洗涤细胞三次 ；
（3）取适量完全培养基充分悬起细胞后加入96孔板，100μl/well，37℃，5%CO2饱和湿度细胞培养箱培养。
1、工作浓度
（1） 融合和亚克隆阶段：10% (v/v) 加入到完全培养基中；
（2）细胞扩大培养和复苏阶段：2.5%-5% (v/v) 加入到完全培养基中。
注意：Hybridoma Feeder 添加因子适用的基础培养基为RPMI 1640、IMDM和DMEM，其它培养基未经测试。Hybridoma Feeder 添加因子不可代替血清使用，只作为细胞培养添加剂使用。
2、产品特性
外 观：红色透明溶液
来 源：Hybridoma Feeder 添加因子是源于小鼠T细胞系的适应性培养基，含多种细胞生长因子，例如，集落刺激因子，IL2，IL6
添加成份：胎牛血清（约10%）；胰岛素；链霉素；青霉素；酚红
过滤条件：经 0.2μm 滤膜多重过滤，并通过质控检测
微生物检测：支原体检测阴性
稳 定 性：2-8℃避光可保存3周，- 20℃可保存24个月，建议分装后冻存，避免反复冻融
3、相比饲养细胞，Hybridoma Feeder 添加因子具有如下特点：
（1） 可以提高杂交瘤细胞的生长速度。
（2）用于新融合细胞，可使克隆集落增多、增大。
（3） 杂交瘤亚克隆时，可以提高亚克隆效率。
（4）完全代替饲养细胞，避免污染，减少工作步骤。
（5）便于客户建立标准化操作步骤（SOP） ，提高细胞培养和实验结果的重复性
同时为满足不同客户要求，Biodragon又推出了无蛋白的杂交瘤生长因子-Hybridoma PF（Protein Free），Hybridoma PF是一种具有独特纯化学配方的杂交瘤细胞添加试剂，能提供杂交瘤细胞生长的必要因子，让细胞充满活力，进而大幅提升细胞存活率，并且不影响抗体分泌效果。相比饲养细胞，Hybridoma PF具有如下特点：
（1）纯化学配方，无生物性成份，不含L-谷氨酰胺，不影响抗体分泌效果；
（2）可以提高杂交瘤细胞的生长速度；
（3）用于新融合细胞，可使克隆集落增多、增大，有效增加细胞融合成功率；
（4）杂交瘤亚克隆时，可以提高亚克隆效率；
（5）完全代替饲养细胞，避免污染，减少工作步骤；
（6）便于SOP的建立。
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- 公司简介
博奥龙Biodragon是一家由留学归国人员创办的生命科学领域技术研发企业，专业从事新型生化试剂的研发和销售。公司理念是通过自主创新的品牌产品改变传统实验模式，使生命科学研究变得更轻松、更高效。公司成立八年多来推出了上万种自主品牌产品，其中包括QuickAntibody™免疫佐剂、QuickShuttle™转染试剂、QuickFreezing™细胞冻存液、QuickVerification™胶体金检测卡、Hybridoma Feeder添加因子和Pan-HPV™ HPV L1抗体等多种独特的自主知识产权产品。秉承“专业、创新”的理念，公司将继续在擅长专业领域做强做大，为客户提供更多的创新产品和服务，力争成为国际知名的品牌生化试剂公司。
公司主要产品有抗体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗体、近300种病理级抗体、近3000余种病毒蛋白及病毒抗体，另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
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